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不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳在生物医疗中的应用 - 环亚集团·AG88

发布时间:2025-04-01   信息来源:皇甫芸璐

定义:不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳是一种在凝胶电泳系统中,通过不同pH、离子强度、缓冲液成分或凝胶孔隙大小的变化,旨在提升电泳分离效果的技术。它的主要目标是扩大分离的范围和提高分辨率。

不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳在生物医疗中的应用 - 环亚集团·AG88

不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳的基本原理

不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳涉及两种或以上的缓冲液成分、pH值和凝胶孔径。在电泳过程中,电位梯度的形成也是不均匀的,从而产生浓缩效应、电荷效应和分子筛效应。这些效应共同作用,使得我们能够有效地分离生物样品中不同分子的成分。

1. 浓缩效应

在电泳的开始阶段,样品通过浓缩胶被浓缩成高浓度的薄层(通常能达到几百倍的浓缩)。当电流通入时,样品胶和浓缩胶中,Cl-离子的解离度最大,因此其迁移率也最大,被称为快离子;随后是解离度次之的蛋白质,而解离度最低的甘氨酸离子(PI=6.0)则运动最慢,被称为慢离子。快离子的迅速移动会在其后形成低电导区域,进而产生较高的电势梯度,促使蛋白质和慢离子加速移动,从而在高低电势梯度之间形成一个快速移动的界面。在此界面附近,样品中的蛋白质逐渐集中,形成一薄层,进入小孔径的分离胶时,即可得到理想的分离效果。

2. 电荷效应

当各种离子进入pH 8.9的小孔径分离胶时,甘氨酸离子的电泳迁移率迅速超过蛋白质,伴随电势梯度的消失。在均一电势梯度和pH的分离胶中,由于不同蛋白质的等电点各不相同,其带电荷量也不同,使得在电场中的受力情况有显著差异。经过一定时间的电泳,蛋白质将按照规格的顺序排列成一条条区带,形成清晰的电泳图谱,这对于生物医学研究尤其重要。

3. 分子筛效应

由于分离胶的孔径较小,分子量和形状不同的蛋白质在通过分离胶时,其迁移率受到的阻碍程度也有所差异。此处的分子筛效应意味着样品经过特定孔径的凝胶时,受到的阻碍程度不同,小分子优先通过,大分子则滞后,形成按分子大小顺序排列的区带。这一现象在生物医疗领域中为蛋白质组学及疾病相关蛋白质的检测提供了重要依据。

在这一领域,选择环亚集团·AG88的分析系统,可以帮助实验室更高效地进行凝胶电泳实验,获取高质量的实验结果,推动生物医学研究的进展。