人B淋巴母细胞HMy2CIR培养指南
一、细胞培养条件
为了保证细胞的良好生长状态，细胞在收到后的处理非常关键。最佳做法是将细胞培养至良好状态后，注满完全培养液并封好瓶口，进行运输。
二、细胞处理步骤
1. 收到细胞后，用75%酒精对细胞瓶进行消毒，随后在超净台内进行严格的无菌操作。接着，将细胞瓶放入37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态，之后再进行进一步处理。
2. 通过显微镜观察细胞的生长情况，并对细胞进行不同倍数的拍照保存（建议40x、100x 和 200x各一张）。前三天的照片是重要的售后凭据，未提供照片则默认收到状态良好。
3. 在传代过程中，建议一瓶使用原瓶的完全培养基，另外一瓶使用自制的完全培养基，以便于进行对比，并在换液后将瓶盖拧松。
三、细胞培养步骤
a、细胞传代
如果细胞尚未达80%汇合度，请将瓶中的完全培养液收集至离心管中，留出5ml完全培养基，放入37℃、5% CO2孵箱进行培养；如果细胞密度超过80%，则可进行传代，具体步骤如下：
- 弃去培养上清，使用不含钙镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
- 加入约1-2ml的0.25%胰蛋白酶消化液至培养瓶，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞消化情况。如果细胞大部分变圆并脱落，即可通过轻轻敲击培养瓶后加5ml以上的完全培养基终止消化。
- 轻轻吹打使细胞完全脱落后吸出，并将悬液转移至15ml离心管中，在1000RPM下离心5分钟，弃去上清液，加入1-2ml完全培养基重悬。
- 按1:2的比例进行分瓶传代（两个T25瓶），并补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养。
b、细胞冻存
- 当细胞生长至培养瓶80%覆盖面积时，弃去T25培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次。
- 加入约1ml的0.25%胰蛋白酶消化液至培养瓶，观察细胞回缩变圆后加入5ml完全培养液终止消化，再轻轻吹打细胞使其脱落。将悬液转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
- 弃去上清，沉淀细胞后加入1ml的雅吉生物无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转入冻存管。
- 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱，若计划转入液氮罐中，需在-80℃冰箱中存放24小时以上后再转入液氮罐。
c、细胞复苏
- 从液氮中取出细胞冻存管（务必佩戴防护面具），快速置于37℃水浴中解冻，直至冻存管中无结晶后，用75%酒精擦拭冻存管外壁。
- 将冻存管中的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
- 弃去上清，沉淀后用5ml完全培养基重悬，并接种至T25培养瓶，放于37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。
- 第二天，换用新鲜完全培养基继续培养。
四、注意事项
部分细胞可能会在运输过程中出现脱落，这是正常现象。如细胞脱落较多，可将培养瓶内所有培养液收集至离心管，1000RPM离心5分钟，收集上清作过渡培养（后期对比培养）。沉淀后加入1-2ml胰酶，轻轻吹打后重悬，消化1-2分钟后加入5ml完全培养基终止反应，随后再次离心、弃上清并重悬。最后按1:2比率进行分瓶传代（两个T25），并补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，放入37℃、5% CO2细胞培养箱培养。
五、售后条款
1）订单出现问题可重发的条件及判定标准：
1. 运输途中如出现细胞丢失、瓶身破损或培养液严重泄漏，均可重发。
2. 细胞污染问题，请在收到产品后48小时内提供真实的实验结果，核实后可重发。
3. 常温发货的细胞在静置24小时后，干冰冻存发货的细胞复苏后24小时内如有大多数细胞未存活（需提供真实且清晰的细胞状态照片），可重发。
4. 干冰冻存发货的细胞复苏24小时内或常温发货的细胞未开封静置4小时后出现污染，均可重发。
5. 如细胞活性出现问题，请在收到产品7天内提供真实的实验结果，用台盼蓝染色法检测细胞活力，核实后可重发。
6. 收到细胞当天及第2、3天需拍照，如3天未告知，视为产品合格。
7. 若在4-7天内出现问题，需提供收到细胞前3天照片和出现问题时的照片以及详细操作步骤，并与技术人员沟通。由技术人员判断是否由我方责任承担，若是，则可重发；若为双方责任，则由双方协商处理或按合同价的50%收费重发。
2）情况不予重发的情形：
1. 因客户原因导致的细胞污染不予重发。
2. 客户操作不当导致细胞状态不佳不予重发。
3. 非本库推荐的细胞培养体系导致细胞状态不佳不予重发。
4. 细胞状态不好且未提供培养前3天的照片，不予重发。
5. 在培养时经其它处理的，不予重发。
6. 收到细胞后未及时告知的，不予重发。
7. 具体情况视情况而定。
如需更详细的指导，请联系环亚集团·AG88以获取专业支持。
津公网安备 12011302120117