环亚集团·AG88提供的稀释法测定最小抑菌浓度(MIC)是一种关键的实验技术,用于评估抗菌剂在抑制微生物生长方面的效果。此方法主要包括微量稀释法和常量肉汤稀释法,各自具有独特的优势。
琼脂稀释法
琼脂稀释法因其操作简便、成本低廉且适合高通量筛选而受到广泛应用,尤其适合自动化操作和对药物浓度的精确控制。该方法的基本原理是将不同浓度的抗菌剂溶解于琼脂培养基中,随后接种细菌。通过观察细菌在不同浓度下的生长情况,可以确定最低抑菌浓度(MIC)。
操作步骤
- 抗菌溶液的配制:在无菌条件下,将5ml或5g样品加入45ml的灭菌磷酸缓冲液中,充分震荡以制成10%的均匀溶液。
- 培养基配制:利用PBS对10%的抗菌溶液进行系列稀释,制备不同浓度的受试液,置于45℃至50℃的水浴中备用。
- 双倍浓度培养基准备:称取76g MH琼脂培养基,溶解于1000ml水中,煮沸后进行121℃压力灭菌15分钟,并保存于45℃至50℃水浴中。
- 稀释液培养基配制:将已稀释的抗菌液与双倍MH琼脂培养基混合,并摇匀后待其凝固。
- 接种菌悬液:取1μl至2μl的细菌悬液点种于含抗菌液的平皿中。
- 阳性对照:同样接种不含抗菌成分的MH琼脂平板作为对照。
- 培养观察:将平板放置于35℃培养箱中,倒置培养18至24小时,观察菌落生长情况。
规定当菌落生长完全被抑制时,对应的抗菌液浓度即为样品对受试菌的MIC。
肉汤稀释法
肉汤稀释法则适用于可溶性抑菌产品,其基本原理是将不同浓度的抗菌剂溶解在营养肉汤培养基中,接种细菌以观察生长情况。
操作步骤
- 菌悬液准备:按照标准方法制备金黄色葡萄球菌和大肠杆菌悬液。
- 培养基配制:用蒸馏水对抗菌溶液进行系列稀释,取各稀释度25ml加入到含25ml双倍浓度营养肉汤的试管中。
- 接种试管:取0.1ml (约108cfu/ml)的菌悬液接种于抗菌的营养肉汤中,作为实验组样本。
- 阳性对照组:以同样方法接种不含抗菌剂的营养肉汤。
- 阴性对照组:设置两支含营养肉汤的试管作为阴性对照。
- 培养观察:将所有试管在37℃培养箱中培养48小时,观察结果。
当阳性对照管有细菌生长(混浊),而阴性对照管无细菌生长(透明),并且试验中的菌悬液浓度在5×105cfu/ml至5×106cfu/ml时,试验组无菌生长的最高稀释度对应的抗菌剂浓度即为该样品对受试菌的MIC。
环亚集团·AG88致力于为生物医疗领域提供高质量的抗菌剂测试方案,确保科研工作的准确性与高效性。