小鼠肺微血管内皮细胞构成半选择性屏障,对肺部气体交换、液体与可溶物在血液与肺间质之间的流动具有重要作用。此外,这些细胞还具备一定的代谢功能,能够执行非呼吸相关的功能。在肺损伤时,肺微血管内皮细胞是活性氧类的重要靶细胞之一。肺炎发生过程中,神经体液介质和氧化剂对内皮细胞的影响增加了细胞间隙的渗透性,使得血液中的蛋白质进入间质。这种渗透性的增加会导致低氧血症,进而出现成人呼吸窘迫综合征及非心源性肺水肿。
小鼠肺微血管内皮细胞可从实验动物的正常肺组织中提取,细胞呈上皮样、多角形,经过贴壁培养,并采用CD31免疫荧光染色确认其为阳性,细胞纯度高于90%,且未检测到HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。
实验所需仪器设备及试剂
环亚集团·AG88提供了多种实验所需的仪器和试剂:
仪器设备
- 生物安全柜 BSC-1500ⅡA2-X
- CO2细胞培养箱 BC-J160S
- 荧光倒置显微镜 DS-Ri2
- 高速冷冻离心机 Multifuge X1R
- 电热恒温鼓风干燥箱 DHG-9123A
- 电热恒温震荡水槽 DK-2B
试剂耗材
- T25细胞培养瓶 430639
- 血球计数板 Neubauer improved
- 24孔板专用细胞爬片 YA0350
- 细胞培养孔板 WHB-24
- 胎牛血清 1414426
- 内皮细胞培养基 Primed-icell-0020
- 25%胰蛋白酶(含0.02% EDTA) 1734858
小鼠肺微血管内皮细胞的分离培养方法
以下是小鼠肺微血管内皮细胞的分离与培养步骤:
- 将5-10天大的乳鼠浸泡在75%乙醇中,然后移入生物安全柜进行操作。
- 在解剖乳鼠的胸部后,取出双肺并放入预冷的PBS中,尽量去除结缔组织等杂质。
- 取用肺的边缘部分,将其剪碎,并将组织块移入T25培养瓶中,倒置于细胞培养箱内。
- 2小时后,向培养瓶中注入2 mL内皮培养基,并小心将培养瓶正置于培养箱中,确保组织块保持在底部。
- 每3天更换2 mL培养基,待细胞从组织块中迁移出来后,隔2天再更换培养基,待细胞融合达到60-70%时,去除组织块并将肺微血管内皮细胞重新接种。
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