## SV40转染人成骨细胞HFOB119培养指南

### 一、细胞培养条件

**细胞名称**：SV40转染人成骨细胞HFOB119 **生长特性**：贴壁生长 **冻存条件**：使用无血清冻存液（货号：C7001） **培养体系**：DMEM/F12 + 0.3 mg/ml G418 + 10% FBS **传代方法**：首次建议以1:2进行传代，通常在2天内更换培养基。 **备注**：使用无菌离心管收集培养基，留作对比培养。如果对比培养效果不佳，建议直接购买我们的完全培养基。

### 二、细胞收到后的处理

细胞到达后，请尽快培养至良好状态，填满完全培养液并密封瓶口，以防运输损失。收到细胞后，用75%酒精喷洒整个细胞瓶进行消毒，放入超净工作台中进行无菌操作。将细胞瓶置于35℃、5% CO2培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态。显微镜下观察细胞生长情况，并拍摄不同倍数的照片（建议40x，100x，200x各一张）。前三天的照片为重要售后依据，未提供照片将视为细胞状态良好。

### 三、细胞培养步骤

#### a. 细胞传代

若细胞未超过80%汇合度，将培养基收集至离心管中，保留5ml完全培养基在35℃、5% CO2条件下培养。若细胞密度超过80%，可进行传代，具体步骤如下：

1. 弃去培养上清，使用不含钙、镁的PBS冲洗细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，放入35℃培养箱消化1-2分钟。显微镜下观察细胞是否脱落，若大部分细胞已变圆脱落，迅速操作，轻敲培养瓶后加入5ml以上完全培养基以终止消化。
3. 轻轻吹打细胞使其完全脱落后吸出，转移至15ml离心管中，在1000 RPM下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2ml完全培养基重悬。
4. 将细胞悬液按照1:2的比例分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入35℃、5% CO2细胞培养箱中培养。

#### b. 细胞冻存

1. 当细胞生长至80%覆盖率时，弃去培养液并用PBS冲洗细胞一次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml，观察细胞回缩变圆后加入5ml完全培养液终止消化。轻轻吹打，使细胞脱落，然后转移至15ml离心管中，在1000 RPM下离心5分钟。
3. 弃去上清液，加入1ml无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转入冻存管中。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱，若需转入液氮罐，需在-80℃冰箱中存放24小时以上再进行转移。

#### c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出细胞冻存管（注意佩戴防护面具），迅速置于35℃水浴中解冻，直至冻存管中无结晶后，用75%酒精擦拭管外壁。
2. 将冻存管中的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，在1000 RPM下离心5分钟。
3. 弃去上清液，重悬细胞于5ml完全培养基中，然后接种至T25培养瓶，放入35℃、5% CO2细胞培养箱中培养。
4. 第二天，换用新鲜的完全培养基继续培养。

### 四、注意事项

某些细胞贴壁不牢，在运输过程中易发生细胞脱落，为正常现象。如脱落较多，可按以下方法处理：

将培养瓶中的所有培养液收集至离心管，1000 RPM离心5分钟，收集上清作为对比培养。对沉淀细胞加入1-2ml胰酶，轻轻吹打，重悬，消化1-2分钟后，加入5ml完全培养基终止反应。再次离心，弃去上清液，重悬于1-2ml完全培养基中，按1:2比例进行分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入35℃、5% CO2培养箱中培养。

### 五、售后条款

1. 细胞出现问题时可重发的情况：
   • 运输过程中细胞丢失、瓶身破损、培养液严重漏液等。
   • 48小时内反馈的细胞污染问题，经核实后重发。
   • 常温发货的细胞静置24小时后，干冰发货的细胞复苏后24小时内大多数细胞未存活，需提供真实清晰的照片。
   • 干冰冻存发货的细胞复苏至24小时或常温发货的细胞静置4小时后未开封出现污染。
   • 7天内反馈的细胞活性问题，须提供细胞活力检测结果。
2. 细胞出现问题时不予重发的情况：
   • 客户造成的细胞污染。
   • 不当操作导致的细胞状态不佳。
   • 非本库推荐的培养体系导致的细胞问题。
   • 未提供前3天的细胞照片。
   • 细胞在培养过程中遭其他处理。
   • 收到细胞后两天内未反馈问题。

为确保细胞的质量与活性，我们强烈推荐使用环亚集团·AG88的优质培养基和冻存液，以保障实验的成功。