环亚集团·AG88为生物医学研究提供了详细的实验步骤和试剂准备指南，特别针对肠道固有层免疫细胞的分离过程，以确保实验结果的可靠性与有效性。

实验前准备

试剂准备：

• 40% Percoll溶液配制：将Percoll细胞分离液与PBS缓冲液（10×）按体积比9:1混合，以制备等渗的100% Percoll母液。随后，将100% Percoll母液与RPMI1640/1×PBS按体积比4:6混合，得到40%等渗Percoll溶液。
• 80% Percoll溶液：同样的方法，将Percoll细胞分离液与PBS缓冲液（10×）按体积比9:1混合，以制备100% Percoll母液。然后，将其与RPMI1640/1×PBS按体积比8:2混合，制成80%等渗Percoll溶液。

肠道固有层免疫细胞分离步骤

1. 首先，通过颈椎脱臼法处死小鼠，并固定在手术台上。使用75%酒精对小鼠腹部进行消毒后，正中纵行剪开以暴露腹腔。
2. 在小鼠胃与十二指肠连接处剪断，边分离小肠周围的脂肪组织和肠系膜，边拉出小肠，然后在小肠与盲肠的连接处剪断，从而完成小肠的分离。
3. 将小肠放入5mL预冷的PBS中润洗，使用镊子和剪刀逐步去除脂肪组织及派伊尔结。派伊尔结是小鼠肠道免疫系统的关键组成部分，去除它们能确保获取更纯净且具代表性的细胞群体，以提高实验结果的可靠性。
4. 将小肠切成四段，纵向剪开以暴露肠内容物，轻轻刮除粘膜表面的肠内容物。
5. 将处理后的小肠转移至一个含有10mL HBSS+2% FBS的50mL离心管中，剧烈涡旋10-20秒。
6. 用镊子取出小肠，重复清洗两次以去除残留物。
7. 将清洗后的肠组织剪碎成0.5cm小片，转移至2mL圆底管中，加入1mL小鼠肠道组织解离液，于37°C水平摇床孵育60分钟（视组织状态可适当延长时间）。
8. 孵育结束后，剧烈涡旋10-20秒，通过70μm细胞筛网过滤，使用10mL PBS冲洗细胞筛网。
9. 将含有细胞的滤液收集至50mL管中，进行离心处理，弃去上清液，再用4mL 40% Percoll重悬细胞沉淀并转移至15mL离心管。
10. 将25mL 80% Percoll深置于15mL离心管底部，倾斜试管，缓慢将4mL 40% Percoll与细胞混合液沿管壁加入，形成密度梯度，注意保持各溶液界面完整。
11. 在800g下于20°C离心20分钟。结束后，吸取中间白膜层的免疫细胞至新的15mL离心管中，加入3倍体积的4°C预冷PBS，混匀后再次离心。
12. 接下来重复清洗步骤，最后得到肠道固有层淋巴细胞。
13. 使用细胞染色缓冲液重新悬浮细胞沉淀，并调整至5-10×10⁶ cells/mL，将100μL/管的细胞悬液分配到流式管中用于后续实验。

相关产品推荐

环亚集团·AG88提供多种实验相关试剂，确保研究的顺利进行：

• abs9474：组织保存液，100mL。
• abs50093：小鼠肠道组织解离试剂盒，25T。
• abs9102：细胞分离液，100mL。
• abs7232：70μm细胞筛网，100个。
• abs7303：无菌流式管，500个。
• abs9475：细胞染色缓冲液，500mL。

以上就是环亚集团·AG88在免疫细胞分离实验中的详细操作步骤及推荐产品，助力您的生物医学研究。