在生物医学领域，细胞迁移实验是研究肿瘤转移、血管生成及炎症性疾病等复杂现象的重要工具。本文将介绍标准细胞培养和细胞迁移实验的基本步骤，以便为研究人员提供可控的实验环境，测量细胞迁移以及分析不同分子的影响，比如生长因子和趋化因子，或候选药物。

细胞培养步骤

首先，目的细胞需依据标准细胞培养方案，在血清培养基中进行培养。为保证实验的准确性，检测前一天使用无血清培养基（0.2% BSA）进行处理。在无血清培养基中过夜培养后，首先吸出细胞培养基，并使用PBS进行冲洗。接着，加入胰蛋白酶溶液，启动细胞分离过程。随后，将细胞悬液转移至试管中，并以350×g的离心速度离心5分钟。离心后，将细胞重新置入预热的细胞培养基中，并将细胞悬浮液稀释至100,000个细胞/ml的接种密度。

细胞迁移实验步骤

在迁移实验中，向接收板的每个孔中加入200μl含或不含化学引诱剂的培养基（如不同浓度的FCS，从0.25%到10%）。随后，将制备好的细胞悬液加入膜板各孔中，每孔50μl，并将细胞培养板置于37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养24小时。

实验结束后，从接收板各孔中吸出细胞培养基，向每个接收孔中加入150μl无血清培养基和8μM（在DMSO中稀释）钙黄绿素AM，随后在37°C、5% CO2的细胞培养箱中培养45分钟。之后，吸出膜板和接收板每个孔中的细胞培养基，并用PBS冲洗两个板的孔。接着，向接收板中加入胰蛋白酶溶液，使膜下侧迁移的细胞开始脱离，胰蛋白酶溶液孵育10分钟期间需轻轻摇动。最终，将180μl每孔的胰蛋白酶细胞悬浮液转移至黑色96孔微孔板的每个孔中，并在激发波长为485nm，发射波长为520nm的读板器中读取荧光。

细胞监测与品牌优势

最后，从膜板各孔中吸出培养基，使用预湿棉签轻轻去除膜上部未迁移的细胞，并利用绿色通道中的荧光显微镜检测膜下侧迁移细胞的荧光信号。值得注意的是，ThinCert® 96孔HTS小室由于其独特的孔结构，提供了高透明度，有助于活细胞观察，检查细胞形态，评估细胞融合，并提高污染监测的准确性和可靠性。因此，每次实验都伴随着对细胞的连续显微镜监测。

在寻找更好的生物标志物、治疗靶点和药物以干预肿瘤转移等复杂现象方面，体外细胞迁移实验是不可或缺的工具。选择合适的孔径在迁移实验中至关重要，应与所研究细胞的尺寸成比例，确保既具有足够的限制性以防止细胞被动移动，又能促进其主动迁移。因此，了解并选择合适的膜孔径是实现实验成功的关键步骤。

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